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細(xì)胞培養(yǎng)你會遇到哪些問題

更新時間:2022-09-08      點(diǎn)擊次數(shù):1286
  細(xì)胞培養(yǎng)的過程控制有點(diǎn)像走鋼絲,要在最短的時間內(nèi),通過細(xì)胞培養(yǎng)的方法獲取更高的產(chǎn)量,則必須謹(jǐn)慎且連續(xù)地控制工藝過程中的參數(shù);若過程管理出現(xiàn)失誤,將導(dǎo)致生產(chǎn)效率下降、運(yùn)行時間延長;更糟糕的,可能會導(dǎo)致整個批次的細(xì)胞培養(yǎng)失敗。
  你在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,會遇到哪些問題
  1、首先講一下細(xì)胞生長緩慢的原因:
  a)更換了血清或者培養(yǎng)基,細(xì)胞需要一段時間適應(yīng)一下;
  b)由于細(xì)胞的特殊種類,培養(yǎng)基中缺少某些生長因子;
  c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染;
  d)傳代的時候細(xì)胞密度過低;
  e)細(xì)胞狀態(tài)老化;
  2、解決上述問題的方法:
  a)如果實(shí)驗(yàn)室沒有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基,可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。
  b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染,可以先不加抗生素,觀察細(xì)胞狀態(tài)。
  c)增加細(xì)胞的接種密度。
  d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時候,及時更換新的細(xì)胞。
  e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿,及時清潔消毒孵箱。
  3、造成細(xì)胞死亡的原因:
  a)細(xì)胞消化過度;
  b)沒有及時換液,營養(yǎng)成分消耗殆盡;
  c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好,換液之后就全死了,應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題。
  4、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染:可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗(yàn)個人操作能力。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下,建議發(fā)現(xiàn)污染時立刻棄掉,重新培養(yǎng)。
  5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡,而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌。
  6、其他注意事項(xiàng):每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重,建議不要使用。
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